Parainfluenza virus type 1 variants: analysis of hemagglutinating, neuraminidase and fusion activities

A existência e o caráter de variantes ou subpopulaçöes derivadas de uma amostra padräo de vírus Sendai foram estudados, usando duas amostras de vírus Sendai selecionadas por técnica baseada na atividade de ligaçäo e receptores, a qual é apresentada por aqueles vírus. Foram estudados o comportamento biológico da neuraminidase de duas diferentes amostras Sendai de vírus parainfluenza tipo 1, sua pH-dependência, cálcio-dependência e relaçäo com as capacidades hemaglutinante e hemolítica. Foi observado que ambas as amostras, aquela considerada como semelhante à padräo e aquela obtida por propagaçäo de subpopulaçäo adsorvida à eritrócitos, mostravam mais significativas atividades hemaglutinante e sialidásica em valores de pH entre 5.0 e 7.0. A amostra considerada como semelhante à padräo, embora näo mostrasse qualquer atividade hemaglutinante frente a hemácias humanas do grupo O, era capaz de mostrar uma atividade sialidásica significativa. A atividade sialidásica revelava cálcio-dependência e relacionamento com a atividade hemolítica. A baixa taxa de hemólise exibida poderia ser explicada pela eficiente atividade sialidásica de estruturas HN sobre receptores celulares, os quais seriam essenciais para o processo de fusäo. As amostras mostravam caráteres diferentes quanto às atividades hemaglutinante e sialidásica, o que sugeriu que a seleçäo de diferentes variantes ou subpopulaçöes, uma observaçäo já feita por alguns autores, seria muito importante de ser compreendida, para um eficiente direcionamento dos processos de diagnóstico e de seleçäo de amostras virais vacinais

Kinetics of fusion with cells of reconstituted Sendai virus envelopes lacking hemagglutinin-neuraminidase.

The fusion potential of reconstituted Sendai virus envelopes containing only the F protein (F-virosomes) has been assessed. F-virosomes and F,HN-virosomes were prepared by solubilization of the intact virus in Triton X-100 followed by its removal using SM-2 biobeads. Viral envelopes containing HN whose disulphide bonds were irreversibly reduced (HNred) were also prepared by treating the envelopes with dithiothreitol followed by dialysis. Both F-virosomes and F,HNred-virosomes hemolysed red blood cells in the presence of wheat germ agglutinin. The rates and extent of hemolysis induced by these virosomes were, however, significantly lower than that induced by F,HN-virosomes. Using a fluorescence probe based membrane mixing fusion assay, F- and F,HNred-virosomes were found to fuse with cultured HeLa cells in the presence of wheat-germ agglutinin. A direct comparison of the fusion activity of F,HN-virosomes and F-virosomes was made by using desialylated HepG2 cells as target containing the asialoglycoprotein receptor (ASGP-R) that binds to a terminal beta-galactose moiety of F protein. A 2- to 3-fold enhancement in the fusion rate when HN was included in the viral envelope was observed. Based on the kinetic data, a model for fusion of paramyxo-virosomes with HepG2 cells is proposed.

Produçäo de interferon por placenta humana / Production of interferon by human placenta

No presente trabalho, foi investigada a produçäo de interferon nos tecidos da placenta humana induzidos por diferentes vírus. A membrana amniótica mostrou ser mais eficiente produtora de interferon quando infectada pelo vírus da doença de Newcastle (NDV) que a membrana ou as vilosidades coriônicas. A irradiaçäo do NDV com a luz ultravioleta (UV) diminuiu sua capacidade indutora nos três tecidos placentários. Os níveis de interferon encontrados em culturas da membrana amniótica ou coriônica, induzidos por vírus para-influenza I (Sendai), foram muito diferentes, dependendo da placenta utilizada, tanto com o vírus vivo como o tratado com a UV. Quando vilosidades coriônicas foram infectadas com este vírus, näo foi encontrada atividade de IFN. Testes comparativos mostraram que o NDV é melhor indutor de interferon do que o vírus Sendai em membrana amniótica. Os vírus Sindbis e Oriboca (vivos ou inativados pela UV) näo induziram títulos mensuráveis de interferon em qualquer dos tecidos mencionados. Concluiu-se que o sistema NDV - membrana amniótica é o mais eficiente na induçäo de IFN e merece investigaçöes mais abrangentes

Replicaçäo de Sendai virus em células epiteliais primárias de camundongo / Sendai virus replication in primary epithelial cells of mice

Células epiteliais primárias obtidas do trato respiratório de camundongos jovens foram infectadas com o Vírus Hemaglutinante do Japäo (HVJ, Sendai Virus) e, a progénie viral, tratada ou näo com tripsina foi titulada através do método de Imunofluorescência Indireta. A progénie de Sendai Virus obtida de células epiteliais de camundongo apresentou um título considerável, demonstrando-se que há ativaçäo das partículas virais, capazes de infectar células LLC-MK-2, nas quais, a progénie viral foi titulada